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酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測抗原的方法有以下三點(diǎn)

發(fā)布日期: 2022-06-15
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   酶聯(lián)免疫吸附實驗用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性,在室溫下穩(wěn)定反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn),能商品化生產(chǎn)。如今應(yīng)用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應(yīng)用*。
  
  酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測抗原的方法有以下三點(diǎn):
  1、雙抗體夾心法
  屬于非競爭結(jié)合,檢測抗原常用的方法,檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接;加入待測標(biāo)本,形成固相抗原抗體復(fù)合物;再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心,洗滌;加底物顯色,根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測。
  
  2、雙位點(diǎn)一步法
  針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇,包被使用一種單抗,酶標(biāo)記使用另一種單抗。測定時將待測抗原和酶標(biāo)抗體同時加入,溫育、洗滌,加入底物顯色。若待測抗原濃度過高時,過量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成,出現(xiàn)鉤狀效應(yīng),顯色降低,甚至假陰性。必要時可將標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)稀釋后重復(fù)測定。
  
  3、競爭法
  用于測定小分子抗原,如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相,然后同時加入待測樣本和酶標(biāo)記的小分子,兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合,溫育一定時間后洗滌,加入酶底物顯色。
  
  特點(diǎn):
  ①酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記抗原具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力;
 ?、诜磻?yīng)體系中,固相抗體和酶標(biāo)抗原是固定*,且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)記和非標(biāo)記抗原的分子數(shù)量和;
 ?、勖庖叻磻?yīng)后,結(jié)合于固相載體上復(fù)合物中被測定的酶標(biāo)抗原的量(酶活性)與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中非標(biāo)記抗原的濃度成反比。